氯普噻吨调节Akt/mTOR通路对人急性髓系白血病细胞自噬和凋亡的影响

作者：王瑞娟; 李超; 段丽娟; 尚淼; 杨如玉

来源：实用医学杂志, 2023, 39(20): 2584-2590.

• 氯普噻吨
• 蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路
• 人急性髓系白血病细胞
• 自噬
• 凋亡

目的 探讨氯普噻吨通过调节蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路对人急性髓系白血病（AML）细胞自噬和凋亡的影响。方法 以SKNO-1、MOLM-13两个细胞系为研究对象，0、20、40、60μmol/L氯普噻吨分别处理SKNO-1、MOLM-13细胞6、12、24 h,CCK-8检测细胞增殖情况。实验分为4组，对照组正常培养、SC79组用5 mg/L SC79处理细胞2 h，氯普噻吨组用40μmol/L氯普噻吨处理细胞12 h，氯普噻吨+SC79组在SC79组基础上添加40μmol/L氯普噻吨处理细胞12 h。单丹磺酰尸胺（MDC）染色检测自噬的发生情况；流式细胞术检测细胞凋亡率；蛋白质免疫印迹检测自噬相关蛋白SQSTM1/p62、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)，凋亡相关蛋白聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶（PARP）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)、激活型caspase3(cleaved caspase3)以及Akt/mTOR信号通路相关蛋白Akt、磷酸化（p）-Akt、mTOR、p-mTOR表达情况。结果 在SKNO-1、MOLM-13细胞中，6、12、24 h时，与0μmol/L氯普噻吨相比，20、40、60μmol/L氯普噻吨处理后细胞增殖抑制率升高（P <0.05）；在同一时间点，随着氯普噻吨浓度的升高，细胞增殖抑制率升高，40μmol/L氯普噻吨处理细胞12 h进行接下来研究。在SKNO-1、MOLM-13细胞中，与对照组相比，SC79组细胞凋亡率、自噬小体阳性率，LC3B、PARP、cleaved caspase3/caspase3蛋白表达水平降低（P <0.05）,SQSTM1/p62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平升高（P <0.05）；而氯普噻吨组表现出相反趋势（P <0.05）；在SC79组基础上添加氯普噻吨，与氯普噻吨组相比，细胞凋亡率、自噬小体阳性率，LC3B、PARP、cleaved caspase3/caspase3蛋白表达水平降低（P <0.05）,SQSTM1/p62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达水平升高（P <0.05）。结论 氯普噻吨能够抑制Akt/mTOR通路促进人AML细胞自噬和凋亡。

• 单位
  南阳市中心医院