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摘要
目的探讨hsacirc0000392(circ0000392)对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响及其潜在作用机制。方法收集2016—2019年于河南大学淮河医院首次经病理诊断明确的42例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织, 根据患者对放射治疗的反应, 将癌组织分为放疗敏感和放疗耐受。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测宫颈癌放疗敏感和放疗耐受肿瘤组织及宫颈癌Hela、SiHa细胞中circ0000392、miR-145-5p、CT10激酶调节子样蛋白(CRKL)的表达。将siRNA circ0000392、miR-145-5p mimic、miR-145-5p inhibitor、pcDNA 3.1-CRKL及其阴性对照分别转染至Hela和SiHa细胞, 细胞经辐射诱导后, 采用克隆形成实验检测细胞存活能力, 流式细胞术检测细胞凋亡情况, Western blot检测Bax和Bcl-2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK) 1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2的表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ0000392、miR-145-5p和CRKL之间的靶向关系。裸鼠成瘤实验观察circ0000392对宫颈癌体内放疗敏感性的影响。结果 circ0000392和CRKL在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中均呈高表达, miR-145-5p在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中呈低表达(均P<0.05)。si-circ0000392#1+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(78.67±10.97)个和(71.00±9.54)个, 均低于si-Ctrl+6 Gy组[分别为(176.00±22.27)个和(158.33±17.56)个, 均P<0.05], 细胞凋亡率分别为(41.55±3.40)%和(31.41±3.29)%, 均高于si-Ctrl+6 Gy组[分别为(15.91±1.37)%和(13.70±1.89)%, 均P<0.05], si-circ0000392#1+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于si-Ctrl+6 Gy组, Bcl2蛋白表达水平低于si-Ctrl+6 Gy组(均P<0.05)。si-circ0000392#1+miR-145-5p inhibitor+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(171.33±25.01)个和(137.00±21.66)个, 均高于si-circ0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(84.67±17.79)个和(71.00±11.00)个, 均P<0.05], 细胞凋亡率分别为(17.41±2.58)%和(15.96±1.25)%, 均低于si-circ0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(40.29±2.92)%和(30.82±2.34)%, 均P<0.05], si-circ0000392#1+miR-145-5p inhibitor+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于si-circ0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组, Bcl2蛋白表达水平高于si-circ0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组(均P<0.05)。circ0000392能够与miR-145-5p靶向结合, 而CRKL是miR-145-5p的下游靶基因。miR-145-5p mimic+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(74.33±10.02)个和(66.00±12.17)个, 均低于mimic NC+6 Gy组[分别为(197.67±17.21)个和(157.67±11.59)个, 均P<0.05], 细胞凋亡率分别为(45.58±2.16)%和(32.10±3.55)%, 均高于mimic NC+6 Gy组[分别为(15.85±2.45)%和(13.99±1.69)%, 均P<0.05], miR-145-5p mimic+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于mimic NC+6 Gy组, Bcl2蛋白表达水平低于mimic NC+6 Gy组(均P<0.05)。miR-145-5p mimic+pcDNA-CRKL+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(158.00±15.88)个和(122.33±13.65)个, 均高于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(71.33±8.02)个和(65.67±12.22)个, 均P<0.05], 细胞凋亡率分别为(19.50±3.45)%和(17.04±0.94)%, 均低于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(44.33±2.36)%和(32.05±2.76)%, 均P<0.05], miR-145-5p mimic+pcDNA-CRKL+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组, Bcl2蛋白表达水平高于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组(均P<0.05)。sh-circ0000392组小鼠肿瘤体积较小, 肿瘤重量降低(均P<0.05)。小鼠移植瘤组织中circ0000392、miR-145-5p、CRKL mRNA相对表达水平降低减少, CRKL、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白相对表达水平降低, Bax蛋白相对表达水平升高(均P<0.05)。结论 circ0000392可增强宫颈癌细胞的放疗敏感性, 其作用机制可能与靶向miR-145-5p调控CRKL/ERK信号通路有关。
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单位河南大学淮河医院
