GADD45A靶向抑制p38 MAPK通路逆转宫颈癌细胞获得性耐药的实验研究

作者：王小萍; 刘海霞; 郑晓霞^*

来源：临床肿瘤学杂志, 2021, 26(06): 499-505.

• 宫颈癌
• GADD45A
• p38
• 顺铂
• 获得性耐药

目的探究生长阻滞和DNA损伤诱导45A(GADD45A)对宫颈癌细胞顺铂(DDP)获得性耐药的影响及可能的分子机制。方法体外培养He La细胞,通过DDP诱导建立He La耐药细胞He La/DDP,实时荧光定量PCR(q PCR)检测GADD45A表达。将He La/DDP细胞分为空白对照组(细胞不做任何处理)、阴性对照组(转染阴性对照病毒空载体)、GADD45A转染组(转染GADD45A过表达慢病毒载体)、GADD45A+Anisomycin组(细胞转染GADD45A过表达慢病毒载体后加入JNK/p38激活剂Anisomycin)。CCK-8法和细胞集落形成法检测He La/DDP细胞耐药性。彗星实验和流式细胞术检测DDP对各组He La/DDP细胞DNA损伤、细胞周期和凋亡的影响。Western blotting法检测各组细胞p38蛋白表达。结果He La细胞中美好中GADD45A m RNA表达量低于正常宫颈鳞状上皮细胞H8(0.70±0.09 vs. 1.00±0.04,P<0.05)。He La/DDP细胞中GADD45A m RNA表达量低于He La细胞(0.48±0.05 vs. 0.70±0.09,P<0.05)。GADD45A转染组He La/DDP细胞对DDP的耐药指数低于空白对照组(23.57±1.26 vs.76.55±5.79),且细胞集落数量减少(119±26 vs.415±33),同时DNA损伤率增加[尾长(75.26±19.83)μm vs.(21.47±6.41)μm],S期细胞比例升高[(34.22±1.49)%vs.(15.40±2.98)%],细胞凋亡率增加[(40.98±4.59)%vs.(5.56±0.77)%],差异具有统计学意义P<0.05)。与空白对照组比较,GADD45A转染组He La/DDP细胞GADD45A蛋白表达增强,但p-p38/p38蛋白比值降低(P<0.05)。GADD45A+Anisomycin组上述指标较GADD45A组被逆转。结论在DDP耐药宫颈癌细胞中GADD45A表达普遍下调,上调GADD45A表达可以降低He La/DDP细胞活性,增加DDP诱导细胞凋亡和DNA损伤,且与抑制p38磷酸化激活有关。

• 单位
  济南市妇幼保健院