利用CRISPR/Cas9技术构建G3BP2基因缺失型BHK21细胞系

作者：陈琳晖; 屈春惠; 王世民^*

来源：现代畜牧兽医, 2023, (10): 6-10.

• CRISPR/Cas9
• 基因敲除
• -/-细胞系" name="keyword">G3BP2-/-细胞系

试验采用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建G3BP2基因敲除的稳定乳仓鼠肾细胞(BHK21)系,并探究其对抗应激能力的影响。将构建的两组PX459-G3BP2-sgRNA重组质粒共转染BHK21细胞,使用嘌呤霉素筛选单克隆细胞株进行连续传代,在传代培养至十代后提取蛋白进行蛋白质印迹技术(WB)检测,将敲除稳定性较好的细胞株提取DNA进行PCR扩增及测序。随后将二硫苏糖醇(DTT)溶液加入构建的G3BP2-/-细胞株和野生型细胞株中进行细胞形态观察,测试G3BP2-/-细胞株对热应激的反应。结果显示,试验得到3株G3BP2稳定表达阴性的细胞株:C8、E10、F9。镜检结果显示,缺失G3BP2基因的BHK21细胞的形态比野生型BHK21细胞的细胞形态更易受到影响。研究表明,试验成功获得了稳定的G3BP2-/-细胞系,并验证了其生物学功能,为后续深入研究G3BP2基因在BHK21细胞中其他作用与机制奠定基础。

• 单位
  新疆农业大学