人类线粒体肌酸激酶的固定化及酶学性质研究

作者：吕广新; 史北辰; 樊帅; 杨兆勇; 张志斐^*; 陈静^*

来源：中国医药生物技术, 2019, 14(04): 302-307.

• 酶类,固相
• 肌酸激酶
• 磷酸肌酸

目的人源肌酸激酶u Mt CK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,开发固定化u Mt CK酶法生成磷酸肌酸,实现其工业化应用价值。方法将异源表达的u Mt CK固定在纳米磁性材料Fe3O4@Histidine-Ni上,制备固定化酶Fe3O4@HistidineNi/uMtCK,并进行催化反应。与游离酶u MtCK比对酶学性质和动力学参数,测定固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/u Mt CK的重复使用次数。结果与游离酶u Mt CK相比,固定化酶Fe3O4@HistidineNi/u Mt CK的最适反应温度提高5℃,最适p H降低0.5个单位,在50℃、pH 7.5下孵育2 h,残余酶活为51%,而游离酶仅为27%;u Mt CK的KmCr为10.7mmol/L,为Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的1.1倍; Fe3O4@HistidineNi/u Mt CK的kcat/KmCr值是5.3 L/(mmol·s),是u Mt CK的1.3倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK在经历9次循环使用后,活力还能保持50%以上,显示了良好的稳定性和重复使用性。结论与u Mt CK相比,Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK具有良好的热稳定性和重复使用性,具有一定的工业化价值。

• 单位
  中国医学科学院医药生物技术研究所; 华北理工大学; 基础医学院