微小RNA–195在糖尿病心肌病乳鼠心肌肥大中的作用及其机制

作者：孔彪; 沈冬丽; 芮涛; 张国辉^*

来源：中华心血管病杂志, 2015, 43(08): 712-717.

• 糖尿病
• 心肌疾病
• 微RNAs

目的研究微小RNA(miRNA)–195在糖尿病心肌病心肌肥大中的作用及其机制。方法应用TargetScan5.1软件预测Smad7为miRNA–195发挥作用的潜在靶点。分离原代SD乳鼠心肌细胞进行培养,贴壁后将原代心肌细胞分为3组,正常对照组心肌细胞用浓度为5 mmol/L葡萄糖培养,高糖对照组心肌细胞用浓度为25 mmol/L葡萄糖培养,实验组心肌细胞经miRNA–195抑制剂转染后用浓度为25 mmol/L葡萄糖培养。培养24、48和72 h时,于倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态学变化,并拍照计算心肌细胞表面积,采用逆转录实时定量聚合酶链反应(RT–PCR)检测心肌细胞miRNA–195和心肌肥大基因β–肌球蛋白重链(β–MHC)mRNA的表达,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测心肌细胞中Smad7蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养上清液中转化生长因子(TGF)–β1浓度。通过抑制miRNA–195表达,观察其对Smad7、β–MHC表达及心肌肥大的影响。结果高糖对照组各时点miRNA–195表达水平均高于正常对照组(P均<0.05),培养48 h时高糖对照组Smad7蛋白表达水平低于正常对照组(P<0.05),而实验组miRNA–195表达水平低于高糖对照组,Smad7蛋白表达水平则高于高糖对照组(P<0.05)。高糖对照组心肌细胞经高糖处理后,Smad7表达与miRNA–195表达呈显著负相关(相关系数为–0.945,P<0.05)。培养48 h时高糖对照组TGF–β1浓度高于正常对照组(P<0.05),与相同时间点高糖对照组比较,实验组TGF–β1浓度则均较低(P均<0.05)。随培养时间的延长,高糖刺激使心肌细胞表面积、β–MHC mRNA表达逐渐增高,其变化趋势与miRNA195表达情况一致。结论 miRNA–195在糖尿病心肌病心肌肥大的发生、发展过程中具有重要作用,其机制可能与下调靶蛋白Smad7表达有关。

• 单位
  江苏大学附属人民医院