P2Y14基因敲除小鼠的构建及免疫功能初探

作者：卢秉霖; 秦居亮; 车安然; 钱春梅; 岑玉蓉; 杜冰; 王秦

来源：现代免疫学, 2022, 42(06): 466-473.

• 嘌呤能受体P2Y
• G蛋白偶联
• 14基因
• 基因敲除
• CRISPR/Cas9
• 免疫反应
• 炎性因子

为探讨嘌呤能受体P2Y, G蛋白偶联，14 （purinergic receptor P2Y, G-protein coupled, 14, P2Y14）在免疫和炎症反应中的作用，采用CRISPR/Cas9技术构建P2Y14基因敲除（P2Y14 knockout,P2Y14 KO）小鼠，采用PCR和测序方法鉴定子代小鼠的基因型，评估小鼠的生长发育状况；FACS检测小鼠胸腺和脾脏T、B细胞及其亚群的百分比；实时荧光定量PCR法和ELISA检测LPS作用下野生型（wild type, WT）组和P2Y14KO组小鼠腹腔渗出巨噬细胞（peritoneal exudative macrophage, PEM）炎症相关因子的mRNA和蛋白水平变化。结果显示，该方法成功构建得P2Y14 KO小鼠；与WT小鼠相比，P2Y14 KO小鼠的体质量以及肝、脾、肾脏质量和组织形态结构无明显差异，但胸腺质量显著增加（P+、CD8+T细胞百分比显著增加（P<0.05,P<0.01）,脾脏淋巴细胞及其亚群无明显差异。LPS刺激条件下，P2Y14 KO小鼠PEM中炎性因子IL-6和趋化因子CCL2在mRNA和蛋白水平上与WT小鼠相比显著降低（有P<0.01,P<0.001）。以上结果表明，该研究成功构建了P2Y14KO小鼠并发现该基因缺失可促进胸腺中T细胞的分化和发育，同时显著减少PEM炎性因子的释放。