缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞中微RNA表达谱及细胞凋亡变化

作者：王含必; 窦帅杰; 刘思邈; 张婉玉; 刘美芝; 邓成艳^*

来源：协和医学杂志, 2022, 13(04): 626-631.

• 子宫内膜腺上皮细胞
• 缺氧
• miR-7704
• miR-7974
• 凋亡

目的 探究缺氧环境下子宫内膜腺上皮细胞(endometrial glandular epithelial cell, EEC)中微RNA(micro-RNA,miRNA)表达谱变化及其对凋亡的影响。方法 取对数生长期EEC,接种至六孔板(1×105个细胞/孔)并随机分为缺氧组和对照组。缺氧组、对照组分别置于缺氧环境(O2∶N2∶CO2体积比为1∶94∶5)和正常氧环境(O2∶CO2体积比为95∶5)中培养。培养4 h后收集细胞，加入Trizol并提取总RNA。采用高通量测序法测定两组EEC中miRNA表达谱变化，采用实时荧光定量PCR(realtime fluorescence quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测miR-7704、miR-7974基因表达水平，采用流式细胞术检测EEC凋亡情况，采用蛋白印迹法(Western blot)检测p53和凋亡相关蛋白表达变化。结果 高通量测序对21种常见miRNA表达水平检测后发现，与对照组比较，缺氧组EEC中16种miRNA表达上调，5种miRNA表达下调；其中对照组表达丰度较高的miR-7704和miR-7974在缺氧组表达下降最为显著(P均<0.05)。RT-PCR结果显示，与对照组比较，缺氧组EEC中miR-7704和miR-7974相对表达量分别降低20%、80%。流式细胞术检测结果显示，缺氧组早期凋亡率及晚期凋亡率均高于对照组(P均<0.001)。Western blot检测结果显示，与对照组比较，缺氧组EEC中p53表达升高，抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2表达降低(P均<0.05)。结论缺氧环境可诱导EEC中miRNA表达谱改变，其中以miR-7974表达下调最为显著。p53可能是miR-7974的靶蛋白，缺氧诱发的EEC凋亡可能通过下调miR-7974水平而促进p53表达实现。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医院