登革病毒衣壳蛋白靶向核酸酶表达系统的建立及应用

作者：秦成峰; 秦鄂德; 于曼; 姜涛; 陈水平; 段鸿元; 邓永强

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2004, 20(6): 757-761.

DOI：10.3969/j.issn.1007-7626.2004.06.009

• 靶向核酸酶
• 登革病毒
• 葡萄球菌核酸酶
• 抗病毒

根据登革2型病毒衣壳蛋白C基因和葡萄球菌核酸酶SN基因序列设计引物,从构建的原核表达载体pLEX-D2C-SN中扩增获得编码登革病毒衣壳蛋白和葡萄球菌核酸酶的融合基因D2 GSN,将其插入到真核表达载体pcDNA6/V5-His中,筛选获得重组质粒pcDNA/D2G-SN.电穿孔转染BHK细胞后,5 mg/L blasticidin压力筛选,通过RT-PCR、间接免疫荧光和免疫印迹鉴定表达的蛋白,体外DNA消化试验检测核酸酶活性.结果表明,融合蛋白D2C-SN在BHK细胞中获得了稳定表达,表达的融合蛋白能够被抗登革病毒衣壳蛋白的单克隆抗体特异识别,并具有良好的核酸酶活性,能够对DNA进行切割.同时,BHK细胞中稳定表达的融合蛋白D2C-SN能够有效抑制登革病毒的增殖,使其感染性降低103～104倍.这些结果为进一步将衣壳蛋白靶向病毒灭活策略应用于人类抗登革病毒感染奠定了基础.

• 单位
  军事医学科学院