构建逆转录病毒pQCXIH-HA-FBXL11表达质粒及稳定转染细胞

作者：马玉实; 范志朋

来源：口腔生物医学, 2012, 3(03): 113-116.

DOI：10.3969/j.issn.1674-8603.2012.03.001

• 克隆构建
• FBXL11
• 逆转录病毒
• 间充质干细胞 Clone construction
• FBXL11
• Retrovirus
• Mesenchymal stem cells

目的:构建pQCXIH-HA-FBXL11逆转录病毒表达质粒,鉴定表达,在牙髓间充质干细胞建立过表达FBXL11的稳定转染细胞。方法:以牙髓干细胞的cDNA为模板,利用PCR方法扩增目的基因FBXL11,PCR产物纯化回收、连接、酶切、测序鉴定,构建pQCXIH-HA-FBXL11质粒。利用FuGENE6转染293T细胞,蛋白质免疫印迹法和实时荧光定量PCR法在蛋白及mRNA水平检测HA-FBXL11的表达。利用逆转录病毒感染牙髓间充质干细胞。结果:成功构建了逆转录病毒表达质粒pQCXIH-HA-FBXL11,蛋白及mRNA水平检测证实其在293T细胞可以有效的表达。成功建立了过表达HA-FB...

• 单位
  首都医科大学附属北京口腔医院