摘要
目的采用实验及网络药理学方法研究额力根-7抗肝纤维化的作用机制。方法将50只大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组及额力根-7低、中、高剂量组, 每组10只。除空白组外, 其余各组大鼠灌胃50%四氯化碳-花生油溶液制备肝纤维化模型。额力根-7低、中、高剂量组分别灌胃135、270、405 mg/kg额力根-7散剂0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC-Na), 1次/d, 连续10周。采用赖氏法检测大鼠血清GPT、GOT含量, 可见光比色法检测ALP含量, 采用HE染色及Masson染色观察肝组织结构。提取肝星状细胞(HSCs)RNA及蛋白, 采用q-PCR技术及Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)mRNA、蛋白表达水平, 流式细胞术检测HSC凋亡情况。通过TCMID、TCMSP数据库及文献检索获得药物有效成分及靶点, 通过OMIM和PubMed:Geen数据库获得肝纤维化靶点, 运用Cytoscape 3.7.2构建"药物-有效成分-靶点-疾病"网络, 运用STRING构建蛋白质相互作用网络(PPI)筛选中心靶标, 运用R语言在线检索Bioconductor 平台对靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。结果与模型组比较, 额力根-7高、中、低剂量组GPT、GOT、ALP水平降低(P<0.01)。与对照组比较, 含药血清低、中、高剂量组α-SMA[(0.24±0.12)、(0.25±0.12)、(0.41±0.15)比(1.00±0.00)]、collagenⅠ[(0.64±0.24)、(0.33±0.13)、(0.28±0.11)比(1.00±0.00)]mRNA水平降低(P<0.05或P<0.01), 含药血清低、中、高剂量组α-SMA[(0.03±0.01)、(0.01±0.00)、(0.01±0.00)比(0.04±0.00)]、collagenⅠ[(0.08±0.01)、(0.10±0.01)、(0.13±0.01)比(0.18±0.01)]蛋白水平降低(P<0.01)。PPI结果显示, 共筛选出额力根-7中35个有效成分, 196个药物靶点, 3 740个疾病靶点, 药物疾病共同靶点170个。GO富集分析获得159个条目, 其中主要的分子功能包括DNA结合转录激活活性、RNA聚合酶Ⅱ特异性、细胞因子受体结合等;KEGG富集分析获得43条信号通路, 其中排在前3位的通路为PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、细胞凋亡。结论额力根-7可通过多成分、多靶点、多通路发挥抗肝纤维化作用。
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单位内蒙古医科大学; 基础医学院