大薯Da-dio5基因CRISPR敲除表达载体的构建

作者：赵洪; 张金兰; 黄东益; 夏薇; 许云^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(19): 6343-6349.

DOI：10.13271/j.mpb.018.006343

• Da-dio5基因
• 大薯(Dioscorea alata L.)
• CRISPR-Cas9
• 表达载体
• 基因敲除

Da-dio5基因是大薯(Dioscorea alata L.) Dioscorin蛋白合成途径中的关键基因。CRISPR/Cas9基因编辑系统早已广泛应用于各种作物的遗传育种。为了研究该基因在大薯块茎储藏蛋白形成过程中的作用机理,构建Da-dio5基因的CRISPR-Cas9敲除载体。本研究利用随机引物法、巢式PCR、启动子库三种方法扩增U3启动子,将U3启动子与水稻(Oryza sativa L.) CRISPR/Cas9载体(pCAMBIA1301-PosU3gRNA-2NLScas9)相连接,构建大薯内源的CRISPR/Cas9通用表达载体(pCAMBIA1301-DaU3pro-2NLS cas9+35T),将Da-dio5靶标序列与大薯通用表达载体相连构建大薯Da-dio5-CRISPR-Cas9基因敲除载体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化大薯,并成功得到的转基因阳性植株。

• 单位
  海南大学