基于CRISPR/Cas9系统的拟南芥双链结合蛋白AtHyl1基因编辑

作者：武亚丹; 吴坤鑫; 张春微; 刘志昕; 余乃通; 王健华; 张秀春^*

来源：基因组学与应用生物学, 2019, 38(06): 2672-2676.

DOI：10.13417/j.gab.038.002672

• CRISPR/Cas9
• 基因编辑
• AtHyl1
• 拟南芥三突变体hyl1dcl2drb4

RNA沉默是植物重要的抗病毒防御机制,双链RNA结合蛋白(dsRNA-binding proteins, DRB)是RNA沉默信号途径中的关键蛋白。DRB1/HYL1是拟南芥基因组编码的7个DRBs之一,本研究将人工合成含2个AtHyl1靶位点序列的串联t RNA-gRNA片段导入CRISPR/Cas9表达载体中,构建双靶点的CRISPR/Cas9表达载体,通过转化拟南芥dcl2drb4双突变体获得36株转基因阳性植株。对经测序分析可能已发生基因编辑的3株进行单克隆测序分析,测序结果表明均已发生编辑,获得了AtHyl1基因被编辑的拟南芥dcl2drb4突变体T1代转基因植物。该结果为研究AtHyl1是否参与DCL4介导的抗病毒RNA沉默通路提供了帮助。

• 单位
  中国热带农业科学院热带生物技术研究所; 海南大学; 农业部