噬菌体展示HIV-1 Tat38-61碱性区51和55位随机突变体文库的构建

作者：葛宜兵; 杨旭芳; 杜哲明; 庞强; 曹洁; 陈秋莉; 王锦红; 张华群; 廖文婷; 祁培培; 刘超; 章萍萍; 邓松华; 潘卫

来源：生物工程学报, 2011, 27(05): 755-763.

DOI：10.13345/j.cjb.2011.05.019

• HIV-1 Tat
• 碱性区
• 随机突变
• 噬菌体展示

为了构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选,采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长Tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的Tat38-61突变体片段HIV-1 Tat38-61(51N/55N),克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库。结果显示文库的库容量为5.0×106,滴度为2.65×1012 TU/mL,阳性克隆率为56.50%;序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布,达到了对文库进行分子进化筛选的要求,为获得可用作疫苗候选物的新型Tat突变体奠定基础。

• 单位
  安徽医科大学; 武警江西总队医院; 中国人民解放军第二军医大学