美洲大蠊提取物CⅡ-3调控SIRT1/mTOR信号通路诱导白血病K562细胞衰老

作者：何思悦; 张成桂; 刘衡; 周玥^*; 唐紫云; 毕子莹; 田露; 李敏瑞

来源：中国中药杂志, 2023, 48(11): 3039-3045.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20221129.401

• 美洲大蠊提取物CⅡ-3
• K562细胞
• 衰老
• SIRT1
• mTOR

该研究旨在探讨沉默信息调节因子2相关酶1(slient mating-type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)/结节性硬化症复合物Ⅱ(tuberous sclerosis complex 2,TSC2)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路在美洲大蠊提取物CⅡ-3诱导人白血病细胞K562细胞衰老中的作用。体外培养K562细胞，设对照组(0μg·mL-1)及美洲大蠊提取物CⅡ-3不同剂量组(5、10、20、40、80、160μg·mL-1),细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测CⅡ-3对K562细胞的增殖抑制作用；流式细胞术检测CⅡ-3对K562细胞周期分布的影响；β-半乳糖苷酶染色试剂盒(senescence-associated β-galactosidase stain kit, SA-β-gal)检测衰老细胞染色阳性百分率；流式细胞术检测线粒体膜电位的改变；荧光定量PCR检测端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase, TERT)的表达；荧光定量PCR和免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1、TSC2和mTOR mRNA及蛋白的表达。结果显示，经美洲大蠊提取物CⅡ-3诱导作用后，CⅡ-3组细胞增殖抑制率高于对照组，当CⅡ-3质量浓度为80μg·mL-1,作用时间为72 h时，CⅡ-3对K562细胞的增殖抑制率最高，故选为实验标准进行后续研究。与对照组相比，CⅡ-3组阻滞在G0/G1的细胞比例升高，S期细胞比例降低；细胞SA-β-Gal衰老染色阳性率升高；线粒体膜电位降低；端粒酶TERT mRNA表达下调；SIRT1和TSC2 mRNA的表达下调，mTOR mRNA的表达上调；SIRT1和p-TSC2蛋白的表达下调，p-mTOR蛋白的表达上调。以上研究结果表明，美洲大蠊提取物CⅡ-3可通过SIRT1/mTOR信号通路诱导K562细胞衰老。

• 单位
  大理大学