为确定微生物法测定米粉中维生素B6含量的不确定度,本文利用SHP-250型生化培养箱,依据GB 5009.154—2016第二法操作指导,进行了米粉中维生素B6的测定。并从样品称量、样品稀释定容、样品测量等方面,分析了微生物测定米粉中维生素B6含量不确定度来源。样品称量、样品稀释定容、样品测量均可以引入维生素B6含量测定不确定度,需要测定操作者从仪器、操作、环境等多个方面严格控制,减小含量测定偏差。