IL-17RA基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定

作者：吴振华; 何丹; 王洪江^*

来源：新疆医学, 2018, 48(09): 942-925.

• 白介素-17受体A
• 慢病毒
• 载体构建
• 过表达

目的构建白介素17受体A(IL-17RA)基因过表达慢病毒载体。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增制备IL-17RA cDNA;将IL-17RA c DNA连接于用Age1酶切消化获得的线性化GV358载体;对PCR法鉴定为阳性克隆的IL-17RAGV358载体进行测序;将IL-17RA-GV 358载体用pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染到293T细胞获得IL-17RA慢病毒包装,运用荧光法行滴度检测;用IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,运用RT-PCR、Western blot检测IL-17RA mRNA及蛋白的表达。结果 IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光,结果显示在稳定转染的细胞中IL-17RA mRNA及蛋白的表达水平较未转染细胞显著增高。结论成功构建IL-17RA-GV358慢病毒载体,为IL-17RA基因的后期研究提供了实验基础。

• 单位
  新疆医科大学附属肿瘤医院