Red重组介导大肠杆菌外膜蛋白A缺失突变菌株的构建及生物学特性初步研究

作者：杨汐静; 陈晓婷; 于思淼; 刘伟

来源：华西医学, 2017, 32(12): 1895-1899.

• 外膜蛋白A
• 表面展示系统
• 基因敲除

目的利用Red同源重组的方法构建大肠杆菌外膜蛋白A(outer membrane protein-A,Omp A)基因缺失株,为后续研究奠定一定的基础。方法以已知大肠杆菌Omp A为靶点在其两端设计同源臂引物,以质粒p KD3为模板利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出氯霉素筛选标记序列,然后采用Red重组技术利用质粒p KD46诱导表达的重组酶通过电击的方法把外源构建打靶片段导入大肠杆菌,构建大肠杆菌Omp A基因缺失突变株。以菌落PCR方法检测基因大小,以蛋白质印迹法检测蛋白表达情况,以重组菌株培养过程的吸光度(A600)值来反映重组子的生长情况。结果成功构建了大肠杆菌Omp A基因缺失突变株,通过蛋白质印迹法检测和细菌生长曲线测定,发现Omp A基因成功完全丢失,突变株的生长曲线与野生型的差异不显著。结论Omp A基因缺失对大肠杆菌的生长无显著影响,为进一步研究疫苗活载体提供了一定基础。

• 单位
  四川大学华西医院; 黑龙江八一农垦大学; 生命学院