牛樟芝actri5基因的克隆与最佳表达培养基的筛选

作者：原晓龙; 李云琴; 王毅^*

来源：西部林业科学, 2019, 48(05): 76-88.

DOI：10.16473/j.cnki.xblykx1972.2019.05.012

• 牛樟芝
• 单端孢霉二烯合酶
• 生物信息学分析
• 基因功能鉴定

为探讨牛樟芝单端孢霉二烯合酶(actri5)基因与单端孢霉烯类化合物间的关系,从牛樟芝基因组中分离并克隆actri5基因,对其进行生物信息学分析和表达谱分析,以获得该基因的最佳表达培养基。结果表明,actri5基因含5个外显子、4个内含子,其蛋白与根纤维孔菌(Fibroporia radiculosa,XP012177824)的TRI5蛋白的一致性为46%;ACTRI5蛋白不含信号肽,无跨膜结构,定位于细胞质基质的内质网上;序列比对分析显示该蛋白含有Mg2+绑定位点(DDXXX)、焦磷酸与二价离子螯合区域(NDXXSFYKE)及FPP结合基序(XXRYRL)3个保守结构域;聚类分析结果显示牛樟芝ACTRI5与绣球菌TRI5(Sparassis crispa,XP027613108)、变色栓菌TRI5(Trametes versicolor,XP008037460)、球孢白僵菌TRI5(Beauveria bassiana,XP008596951)、里氏木霉TRI5(Trichoderma reesei,XP006964535)和Aspergillus costaricaensis TRI5(XP025537855)聚为一支,该分支均编码单端孢霉二烯合酶;actri5基因在以果糖为碳源添加物及以番茄浸粉、酪蛋白胨和胰蛋白胨为氮源添加物的培养基上表达,而在其他培养基上不表达。本研究为牛樟芝中tri5基因功能的进一步研究、单端孢霉烯族化合物检测和异源表达奠定基础。