NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性

作者：郑丽端; 童强松; 杨渝珍; 侯晓华; 杨秀萍; 董继华

来源：中国生物化学与分子生物学报, 2007, (08): 625-630.

DOI：10.13865/j.cnki.cjbmb.2007.08.010

• 胎肝激酶-1
• 血管内皮细胞
• 启动子
• 报告基因

为克隆小鼠胎肝激酶-1(fetal liver kinase-1,FLK-1)基因上游启动子序列,并观察其不同截短片段在小鼠血管内皮细胞中的启动子活性,以小鼠全基因组为模板,通过PCR扩增方法获得-258~+299bp、-96~+299bp、-71~+299bp、-36~+299bp大小的FLK-1启动子片段,将其定向克隆入pGL3-Basic,构建荧光素酶报告基因载体,并制备NF-κB结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体介导下,报告基因载体瞬时转染小鼠血管内皮细胞株SVEC4-10.结果发现,在小鼠血管内皮细胞中,各FLK-1启动子片段均有活性;-71~-36bp区存在FLK-1启动子的核心调控元件.针对该区域NF-κB结合位点进行突变或缺失,能导致启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明该区段能结合转录因子NF-κB.结果提示,成功克隆了在血管内皮细胞中具有活性的FLK-1上游启动子序列,NF-κB是决定其基本活性的重要转录因子,为进一步研究FLK-1基因的转录调控机制奠定了基础.

• 单位
  中心实验室; 华中科技大学同济医学院附属协和医院