EV71结构蛋白VP1的原核表达及VP1单克隆抗体的制备

作者：李晨阳; 王弋; 古艳丽; 古亚楠; 陈海燕; 田璐; 陈丽云; 彭涛

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2012, (09): 956-959.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006556

• 肠道病毒71型
• VP1
• 单克隆抗体 enterovirus 71
• VP1
• monoclonal antibody

目的:原核表达EV71结构蛋白VP1并制备其单克隆抗体。方法:以肠道病毒71型(EV71)P1基因为模板,设计引物扩增出目的片段VP1,将其连接至大肠杆菌表达载体pET-32a(+)上,转化大肠杆菌TG1,筛选出阳性克隆后进行测序。将重组表达载体pET-32a(+)-VP1转化大肠杆菌表达菌株BLgold(DE3),对该工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,表达产物以包涵体的形式存在。包涵体用6 mol/L盐酸胍溶解,经过Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白。用纯化的VP1蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体(mAb)。结果:获得了24株mAb,其中1株EV71 Western...

• 单位
  广州锐达生物科技有限公司; 中国科学院广州生物医药与健康研究院; 呼吸疾病国家重点实验室