14色流式检测人外周血白细胞亚群方案的建立

作者：黄巧容; 蒋燕妮; 李慧芳; 李雪; 孟文彤^*

来源：四川大学学报（医学版）, 2022, 53(01): 127-132.

• 多色流式细胞术
• 人外周血
• 方案优化
• 免疫表型
• 细胞亚群

目的建立14色流式检测人外周血中白细胞亚群方案。方法用细胞膜表面抗体CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56、CD16、CD14、CD25、CD127、HLA-DR、CD123、 CD11c和核酸染料DAPI建立14色流式染色方案,检测人外周血白细胞主要细胞亚群。取健康成年志愿者外周血标本分别对各抗体进行抗体滴度实验、光电倍增管(photomultiplier tube, PMT)电压优化、单色染色和减一色染色,确定检测方法和检测条件后,对18例健康成年志愿者外周血标本进行检测分析。结果根据细胞分群情况和染色指数选择抗体最适质量浓度:CD25和CD127为8.0μg/mL;CD45、CD3、CD14和CD123为4.0μg/mL;CD8、CD19、CD56、CD16、HLA-DR和CD11c为2.0μg/mL;CD4为1.0μg/mL;DAPI使用质量浓度为0.1μg/mL。CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56、CD16、CD14、CD25、CD127、HLA-DR、CD123、CD11c和DAPI检测电压分别为:450 V、410 V、400 V、550 V、405V、500 V、520 V、550 V、550 V、400 V、450 V、400 V、580 V和300 V。单色染色和减一色试验确定合适的荧光补偿。采用建立的14色流式检测人外周血白细胞主要亚群的方案检测了18例健康成年人外周血样本,可分析出外周血中各细胞亚群在白细胞中的百分比,以及主要细胞群的免疫表型。结论成功建立14色流式检测人外周血白细胞亚群方案,结果稳定可靠,操作简便。

• 单位
  四川大学华西医院