小鼠抗KLH多克隆抗体的制备及TDAR实验间接ELISA定量检测方法的建立

作者：钟文桦; 甘连芳; 钟立璠; 焦佳琪; 杨照新^*

来源：中国免疫学杂志, 2023, 39(03): 586-594.

DOI：10.3969/j.issn.1000-484X.2023.03.023

• 钥孔血蓝蛋白
• T细胞依赖性抗体反应(TDAR)
• 酶联免疫吸附法
• 定量分析
• 抗体

目的：通过制备小鼠抗KLH多克隆抗体，优化反应条件建立KLH特异性抗体ELISA定量分析方法，以期提供一种特异性好、灵敏度高及误差低的TDAR实验检测方法。方法：利用盐析沉淀和亲和层析纯化技术分离和纯化小鼠抗KLH特异性多克隆IgG抗体；以纯化后的抗体作为标准品，建立TDAR实验间接ELISA定量检测方法，并对该方法进行线性范围、特异性、变异系数(CV)及检测限验证。结果：以KLH包被浓度为80μg/ml，山羊抗小鼠IgG/HRP酶标二抗的稀释倍率为1∶20 000条件进行间接ELISA定量分析的方法学验证，检测线性范围为390.63～25 000 ng/ml,R2=0.984 8，线性良好；批内和批间CV均<10%；检测限为194.83 ng/ml。结论：通过制备抗KLH多克隆抗体，并优化实验反应条件来建立间接ELISA定量分析方法，其线性范围、特异性及批内、批间CV均满足实验要求，是一种高灵敏度的TDAR实验检测方法。

• 单位
  海南医学院