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摘要
目的 研究核因子E2相关因子2(NRF2)在三氯甲烷致人正常肝细胞株L02细胞氧化应激中的作用。方法 （1）以浓度为1、2、4、8、12、16和20 mmol/L的三氯甲烷溶液（以二甲基亚砜溶解）刺激L02细胞，并设对照组和空白组，培养24 h后，以CCK-8比色法检测细胞存活率，筛选三氯甲烷刺激浓度。（2）取对数生长期L02细胞随机分为对照组和低、中、高剂量组，分别以终浓度为0、4、8、12 mmol/L的三氯甲烷染毒24 h后，收获细胞，以比色分析法检测氧化应激指标超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力和丙二醛水平，以实时荧光定量聚合酶链式反应法检测NRF2、血红素加氧酶-1(HO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLC）和醌氧化还原酶1(NQO1)的mRNA表达，以蛋白质印迹法检测NRF2、HO-1、GCLC和NQO1蛋白的表达。结果 （1）当三氯甲烷刺激浓度为4、8、12、16和20 mmol/L时，L02细胞存活率均较对照组出现有统计学意义的下降（P值均<0.05）；选择0、4、8和12 mmol/L作为后续实验的三氯甲烷刺激剂量。（2）与对照组比较，3个剂量组L02细胞内SOD和GSH-Px活力均下降（P值均<0.05），丙二醛水平均上升（P值均<0.05），均呈剂量-效应关系。中剂量组L02细胞内CAT活力低于对照组（P<0.05），高剂量组L02细胞内CAT活力低于其余3组（P值均<0.05）。与对照组比较，低剂量组L02细胞中NRF2 mRNA相对表达水平下降（P<0.05），中剂量组L02细胞中NRF2 mRNA相对表达水平升高（P<0.05），高剂量组L02细胞中NRF2mRNA和NRF2蛋白的相对表达水平均升高（P值均<0.05），且3个剂量组L02细胞中HO-1、GCLC、NQO1 mRNA和GCLC、NQO1蛋白的相对表达水平均升高（P值均<0.05）。高剂量组L02细胞中NRF2 mRNA相对表达水平高于低和中剂量组（P值均<0.05）,NRF2蛋白相对表达水平高于低剂量组（P<0.05），但HO-1和GCLC mRNA与HO-1蛋白的相对表达水平均低于中剂量组（P值均<0.05）。结论 三氯甲烷染毒可通过诱导氧化应激而抑制L02细胞增殖，呈剂量-效应关系；在此过程中，NRF2介导的抗氧化机制被激活，诱导NRF2信号通路下游的抗氧化防御和解毒相关靶基因的表达活化，上调HO-1、GCLC和NQO1的表达，以缓解三氯甲烷所致的氧化损伤。
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单位公共卫生学院; 广东药科大学
