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摘要
目的探讨微小RNA(microRNA,miR)-140缺失对小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)发展的影响及机制。方法选取60只C57BL/6J小鼠,采用随机数字表法分为对照组、模型组和miR-140抑制组,每组20只。对照组小鼠采用普通动物饲料喂养,模型组和miR-140抑制组采用高脂饮食喂养。从第4周开始,miR-140抑制组每日腹腔注射mimics inhibitor质粒,持续1周,对照组及模型组腹腔注射相应体积的生理盐水。在第4周结束时,每组选取2只小鼠验证是否造模成功,随后腹膜内注射10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)麻醉,股动脉取血,同时取出肝脏。计算肝脏脂肪变积分、炎症坏死灶积分、气球样变积分及非酒精性脂肪性肝炎活动度积分(non-alcoholic steatohepatitisactivityscore,NAS)。采用酶联免疫吸附法检测小鼠肝组织天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测小鼠肝组织miR-140、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)及Toll样受体-4(Toll-like receptor4,TLR-4)mRNA相对表达量。采用免疫组织化学法检测NF-κB和TLR4蛋白水平。结果对照组、模型组和miR-140抑制组小鼠肝组织脂肪变积分[(0.00±0.00)分vs(3.12±0.23)分vs(4.80±0.16)分]、炎症坏死灶积分[(0.52±0.21)分vs(2.95±0.24)分vs(4.13±0.28)分]、气球样变积分[(0.00±0.00)分vs(1.98±0.26)分vs(2.65±0.20)分]、NAS积分[(0.48±0.32)分vs(7.29±0.34)分vs(9.41±0.51)分]、AST [(43.24±6.89)U/L vs(83.21±10.98)U/L vs(129.36±11.14)U/L]、ALT [(60.21±12.36)U/L vs(83.21±10.98)U/L vs(135.36±9.34)U/L]、TNF-α[(145.77±6.46)μg/L vs(267.86±6.98)μg/L vs(439.45±6.98)μg/L]、IL-6 [(47.13±15.95)μg/L vs(187.66±9.47)μg/L vs(334.14±12.74)μg/L]、miR-140 mRNA相对表达量(4.96±0.21 vs 1.29±0.49 vs 0.86±0.54)、NF-κB mRNA相对表达量(0.96±0.21 vs 2.29±0.49 vs 4.56±0.54)、TLR4mRNA相对表达量(0.89±0.39 vs 3.01±0.43 vs 5.81±0.26)、NF-κB蛋白相对表达水平(2.63±0.32vs 3.14±0.29 vs 5.15±0.31)和TLR4蛋白相对表达水平(3.96±0.31 vs 5.01±0.26 vs 6.95±0.34)差异均有统计学意义(P均<0.001)。模型组肝组织脂肪变积分、炎症坏死灶积分、气球样变积分、NAS积分、AST、ALT、TNF-α、IL-6、NF-κB mRNA相对表达量、TLR4 mRNA相对表达量、NF-κB蛋白相对表达水平和TLR4蛋白相对表达水平均显著高于对照组,miR-140 mRNA相对表达量显著低于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.001)。miR-140抑制组肝组织脂肪变积分、炎症坏死灶积分、气球样变积分、NAS积分、AST、ALT、TNF-α、IL-6、NF-κB mRNA相对表达量、TLR4 mRNA相对表达量、NF-κB蛋白相对表达水平和TLR4蛋白相对表达水平均显著高于模型组,miR-140 mRNA相对表达量显著低于模型组,差异均有统计学意义(P均<0.001)。结论 miR-140缺失可促进小鼠NAFLD的发展,其机制与miR-140抑制导致肝组织NF-κB和TLR4 mRNA相对表达量及蛋白表达水平升高有关。
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单位陕西中医药大学附属医院
