抗血管生成药物增加血清饥饿环境中MDA–MB–231乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力

作者：刘薇; 张翠翠; 王晶; 李凯^*

来源：中华肿瘤杂志, 2015, 37(04): 244-250.

• 乳腺肿瘤
• 血管生成抑制剂
• 胎牛血清
• 缺氧
• 肿瘤浸润

目的观察在缺氧和(或)血清饥饿环境中,重组人血管内皮抑素和贝伐珠单抗对人乳腺癌MDA–MB–231细胞侵袭和迁移能力的影响,探讨抗血管生成药物治疗的潜在风险。方法将MDA–MB–231细胞分别置于4种环境培养,分别为营养环境(10%胎牛血清)、缺氧(1%氧气)+营养环境、饥饿环境(无胎牛血清)和缺氧+饥饿环境。在每种培养环境中,分别设空白组(未给予抗血管生成药物)、抑素组(给予重组人血管内皮抑素)和单抗组(给予贝伐珠单抗)。以CCK–8法计算重组人血管内皮抑素及贝伐珠单抗的细胞生长抑制率,确定其最适工作浓度与时间,并对各组细胞行Transwell细胞侵袭实验和细胞迁移实验,以Western blot检测细胞中c–Met和基质金属蛋白酶9(MMP–9)的表达。对饥饿环境中的处理组细胞行Exiqon miRBase 18.0 microRNA芯片杂交,以实时荧光定量PCR法验证杂交芯片实验中检测到的微小RNA。结果 800 mg/L重组人血管内皮抑素作用48 h和24 h后,细胞抑制率分别为(32.2±2.5)%和(27.0±1.3)%(P=0.023);80 mg/L贝伐珠单抗作用48 h和24 h后,细胞抑制率分别为(30.5±1.4)%和(26.1±2.4)%(P=0.015)。在饥饿环境中,空白组侵袭、迁移穿膜细胞数分别为(28.8±2.2)个和(31.4±1.5)个,与单抗组和抑素组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白组中c–Met和MMP–9蛋白的相对表达量分别为0.213±0.017和0.542±0.048,与单抗组和抑素组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在缺氧环境中,抑素组侵袭、迁移穿膜细胞数分别为(17.5±2.1)个和(16.5±2.8)个,单抗组分别为(16.3±3.5)个和(17.5±2.4)个,与空白组比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。缺氧对细胞侵袭迁移能力、c–Met和MMP–9的表达亦无影响,差异无统计学意义(均P>0.05)。经实时荧光定量PCR验证,微小RNA中仅miR2355和miR375变化稳定。在饥饿环境中,空白组细胞中miR375和miR2355的相对表达量分别为0.550±0.036和0.852±0.121,与单抗组和抑素组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);抑素组细胞中miR375和miR2355的相对表达量分别为0.295±0.012和0.253±0.011,单抗组分别为0.234±0.020和0.309±0.022,差异均无统计学意义(均P>0.05)。而在缺氧环境中,药物干预并未影响miR2355和miR375的表达水平(均P>0.05)。结论血清饥饿环境增加了MDA–MB–231细胞的侵袭、迁移能力;重组人血管内皮抑素和贝伐珠单抗均可能增加侵袭、迁移能力。

• 单位
  徐州市中心医院; 天津医科大学