基于18S rRNA的胎毛滴虫感染PCR诊断方法的建立

作者：刘继兵; 赵洪喜^*

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(05): 682-685.

• 猫
• 胎毛滴虫
• PCR
• 诊断方法

根据GenBank已发表的胎毛滴虫18S r RNA基因序列设计合成引物，建立胎毛滴虫PCR检测方法。以胎毛滴虫阳性重组质粒pUCm-T-TF18S为模板，以猫贾第虫基因组DNA、猫球虫基因组DNA、猫细小病毒基因组DNA、猫冠状病毒基因组cDNA为对照进行PCR检测，分析该方法的特异性。将胎毛滴虫阳性重组质粒以10倍为梯度稀释成8个不同浓度，进行PCR检测，分析该方法的敏感性。取分别置于-20℃3、 6、 9、 12个月的pUCm-T-TF18S质粒进行PCR检测，分析该方法的稳定性。用建立的PCR检测方法对20份猫粪样进行检测，并与镜检结果进行对比。结果显示，重组质粒pUCm-T-TF18S PCR扩增后出现特异性条带。测序结果表明，产物序列长度为1 264 bp，经BLAST序列比对分析，与猫源胎毛滴虫(GenBank登录号M81842.1)序列一致性为99.53%。建立的胎毛滴虫PCR检测方法与猫球虫、猫贾第虫、猫冠状病毒、猫细小病毒均无交叉反应；可检测的最低模板浓度为4.52×105拷贝/μl；胎毛滴虫pUCm-T-TF18S质粒在-20℃冰箱放置12个月后仍可检测出目的条带。该方法从20份猫粪样中检出16份胎毛滴虫核酸阳性，较传统显微镜检查结果(13份)更为准确、敏感。提示建立的胎毛滴虫PCR检测方法特异性强、敏感性高、稳定性强，可用于临床上胎毛滴虫的检测与流行病学的调查。

• 单位
  宁夏大学