重组抗HER2人源化单克隆抗体大规模制备及活性鉴定方法学建立

作者：陈观平; 汪一帆; 应栩华^*

来源：中国药理学通报, 2021, 37(06): 884-888.

• 重组
• HER2
• 人源化
• 单克隆抗体
• 中国仓鼠卵巢细胞
• 纯化

目的建立大规模表达重组人源化HER2单克隆抗体(Anti-her2)并测定重组抗体活性的方法。方法利用Anti-her2重链、轻链真核表达载体质粒共同转化CHO细胞,筛选稳定表达株,然后放大培养,并利用Protein A亲和层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、HPLC检测产物纯度,Western blot检测产物特异性,同时比较重组抗体的活性。结果筛选得到1株稳定表达的细胞株,收液后蛋白BCA定量为135.9 mg·L-1。纯化后获得的目的蛋白相对分子质量约为185 k D,蛋白纯度在99%以上,与商品化的"赫赛汀"一致;活性检测显示其活性与"赫赛汀"相当,细胞实验揭示其能显著抑制BT-474细胞增殖及胞内HER2的表达。结论该方法筛选获得的重组蛋白,与商品化药物性质基本一致,这为重组抗体药物的大规模悬浮培养放大和工业化生产奠定了基础。

• 单位
  浙江省立同德医院