RGD多肽修饰的芬维A铵脂质体对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响

作者：王梦蛟; 崔艾丽; 金承龙; 方宇辉; 金哲虎^*

来源：中华皮肤科杂志, 2019, 52(03): 182-188.

• 黑色素瘤
• 细胞系, 肿瘤
• 芬维A铵
• 脂质体
• 整合素αVβ3
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 细胞迁移分析

目的探讨芬维A铵(4-HPR)对B16F10和A375黑素瘤细胞增殖、凋亡及迁移的影响, 并观察脂质体及以RGD多肽修饰的脂质体对药物摄取及作用的影响。方法采用薄膜-水化法制备4-HPR脂质体(4-HPRL), 并以RGD多肽对4-HPRL进行修饰, 制备RGD-4-HPRL, 对其浓度、粒径、电位、载药量及包封率进行检测。体外培养B16F10和A375细胞, 分为对照组、4-HPR组、4-HPRL组和RGD-4-HPRL组, 给4-HPR组分别加入含相同浓度4-HPR的4-HPR原料药、4-HPRL及RGD-4-HPRL, 对照组加入等量培养液。作用不同时间后, 通过CCK8细胞计数试剂盒检测细胞活性, 膜联蛋白V/碘化丙锭染色检测细胞凋亡, 细胞划痕实验检测药物对细胞迁移的影响。以香豆素6(C6)代替4-HPR制备C6脂质体(C6L)和RGD-C6L, 流式细胞仪检测细胞对药物的摄取情况。采用SPSS22.0软件进行统计学分析, 多组间数据比较采用单因素方差分析, 两两组间显著性差异比较采用t检验。结果制备的4-HPRL和RGD-4-HPRL溶液可明显提高4-HPR的水溶性, 并具有较高的载药量和包封率。粒径分布均匀, 平均在100 nm以下。CCK8实验表明, 4-HPR可明显抑制B16F10和A375细胞增殖, 且相同浓度下4-HPRL对细胞增殖的抑制率高于4-HPR(P < 0.01), RGD-4-HPRL又高于4-HPRL(P < 0.01或P < 0.05)和4-HPR(P < 0.01)。细胞凋亡实验表明4-HPR浓度分别为10 mg/L或20 mg/L时可明显诱导B16F10和A375细胞凋亡。4-HPRL组两种细胞凋亡率高于4-HPR组(均P < 0.01), RGD-4-HPRL组高于4-HPRL组(均P < 0.01)和4-HPR组(均P < 0.01)。细胞划痕实验显示, 4-HPR可抑制两种细胞划痕愈合和细胞迁移, 4-HPRL和RGD-4-HPRL抑制能力明显优于4-HPR原料药。摄取实验显示, B16F10细胞C6荧光强度在对照组为2.15 ± 0.28, C6组为8.56 ± 0.36, C6L组为20.48 ± 0.13, RGD-C6L组为22.55 ± 0.07, 各组间差异有统计学意义(F = 67 194.186, P < 0.01), 其中, C6L组与RGD-C6L组荧光强度明显高于C6组(均P < 0.01), 且RGD-C6L组高于C6L组(P < 0.01)。结论 4-HPR可抑制黑素瘤A375和B16F10细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡, 脂质体和RGD靶向脂质体可明显增强4-HPR对黑素瘤细胞的作用。

• 单位
  延边大学附属医院