H3亚型犬流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者：吴颖; 王福军; 王秀荣; 施建忠; 杨焕良; 邓国华; 陈艳; 陈化兰; 刘丽玲^*

来源：中国预防兽医学报, 2021, 43(07): 722-726.

• H3亚型犬流感病毒
• TaqMan MGB探针
• 荧光定量RT-PCR

为建立H3亚型犬流感病毒(CIV)荧光定量PCR检测方法,本研究根据H3亚型CIV HA基因的保守区序列,设计合成一对特异性引物和Taq Man MGB探针,经条件优化后初步建立了H3亚型CIV荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,构建的重组质粒标准品在109拷贝/μL～102拷贝/μL浓度范围内有良好的线性关系,标准曲线的相关系数为0.999。该方法仅能特异性扩增H3N2亚型CIV核酸,与H3N2亚型禽流感病毒、人流感病毒和猪流感病毒及H9N2亚型CIV、H1N1亚型猪流感病毒、犬腺病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒等病毒核酸均无交叉反应。该方法最低可检测到的质粒标准品浓度为19拷贝/μL,敏感性高于普通PCR方法。组内与组间重复性试验的变异系数均小于1%。利用该方法对83份临床样品的核酸进行检测,检测结果与病毒分离结果总符合率为97.59%。本研究建立的荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便,为临床H3亚型CIV的快速检测提供可靠方法。

• 单位
  黑龙江民族职业学院; 兽医生物技术国家重点实验室; 农业部; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所