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摘要
目的 建立一种经济高效、结果稳定的酵母菌落PCR模板DNA制备方法。方法 将乙酸乙酯处理与高温破壁相结合，建立乙酸乙酯-高温破壁法制备酵母菌落PCR模板DNA，并以此方法对酵母进行目的基因扩增与阳性转化子的筛选。同时，以酵母基因组DNA及高温破壁法制备的模板作为对照。结果 乙酸乙酯-高温破壁法制取的模板可直接用于菌落PCR扩增目的基因片段以及筛选阳性转化子，与提取酵母基因组DNA相比，采用乙酸乙酯-高温破壁法制取模板的准确率可达90%以上，而高温破壁法制备模板结果不稳定。结论 本实验建立的方法简单高效，结果稳定，成本低廉，可满足大规模筛选阳性转化子。
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单位生命科学技术学院; 黑龙江八一农垦大学
