波形蛋白过表达质粒pcDNA3.1b-Vim的构建及鉴定

作者：邵晓婷; 施倩雯; 王凯旋^*

来源：齐齐哈尔医学院学报, 2019, 40(12): 1453-1455.

• 波形蛋白
• pcDNA3.1b质粒

目的以波形蛋白(vimentin)基因为靶基因,构建波形蛋白过表达质粒pc DNA3.1b-Vim。方法在PC12H细胞中抽提RNA,进行逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),得到c DNA,设计引物将目的基因扩增并进行胶回收,将空载质粒pc DNA3.1b与目的基因片段进行双酶切(分别为EcoRI/Xba I)、连接,构建重组过表达质粒,转化到Top10感受态细胞,经氨苄青霉素筛选挑取阳性克隆,扩大培养,提取质粒,凝胶电泳鉴定并进行测序分析。结果凝胶电泳鉴定及DNA测序分析显示重组质粒pc DNA3.1b-Vim构建成功。结论成功构建波形蛋白过表达质粒pc DNA3.1b-Vim,为研究波形蛋白的生物学功能打下基础。

• 单位
  金华市中心医院