环状RNA-7靶向微小RNA-7促进食管鳞癌细胞放疗抵抗的实验研究

作者：柯舜; 李瑞超; 汪晶; 房明浩^*

来源：中华实验外科杂志, 2022, 39(01): 85-88.

• 食管鳞癌
• 凋亡
• 环状RNA
• 放疗抵抗

目的探讨环状RNA-7(circularRNA, ciRS)-7在食管鳞癌细胞放疗抵抗中的作用及生物学机制。方法采用慢病毒转染食管鳞癌细胞系KYSE410和KYSE510构建ciRS-7敲降细胞系(分为正常对照组和sh#1组、sh#2组)。不同剂量射线(2 Gy组、4 Gy组、8 Gy组)照射上述细胞, 收集各组细胞染色, 流式细胞术检测活细胞比例。双荧光素酶报告系统检测ciRS-7与微小RNA(microRNA, miR)-7的调控关系;KYSE410细胞分正常组、ciRS-7敲降组, RT-qPCR检测miR-7表达。shRNA转染KYSE410细胞, 分为干扰组(正常对照组、敲降ciRS-7组);过表达组(ciRS-7和miR-7同时过表达组、阴性对照组、miR-7过表达组),蛋白质印迹法检测各组中B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(bcl-2)的表达。两组间比较采用独立样本的t检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。结果 KYSE410细胞sh#1组(0.36±0.03)、sh#2组(0.37±0.12)ciRS-7表达量低于正常对照组(1.00±0.01,t=24.460、8.910,P<0.05); KYSE510细胞sh#1组(0.40±0.08)、sh#2组(0.34±0.08)ciRS-7表达量低于正常对照组(1.00±0.08,t=8.514、9.550,P<0.05), 差异均有统计学意义。4 Gy射线照射后, KYSE410细胞sh#1组[(37.00±3.07)%]、sh#2组[(39.50±0.70)%]活细胞比例低于正常对照组[(63.50±6.36)%,t=7.400、5.301,P<0.05]; KYSE510细胞sh#1组[(39.00±8.48)%]、sh#2组[(39.50±0.70)%]活细胞比例低于正常对照组[(73.50±6.36)%,t=4.600、7.509,P<0.05]。8 Gy射线照射后, KYSE410细胞sh#1组[(22.50±3.53)%]、sh#2组[(39.50±0.70)%]活细胞比例低于正常对照组[(50.50±2.12)%,t=9.604、11.800,P<0.05]; KYSE510细胞sh#1组[(33.00±2.82)%]、sh#2组[(31.00±2.82)%]活细胞比例低于正常对照组[(60.50±2.12)%,t=11.000、11.800,P<0.05], 差异均有统计学意义。KYSE410细胞过表达ciRS-7组(1.00±0.23)的miR-7表达低于正常对照组(0.54±0.08,t=3.191,P<0.05),双荧光素酶报告系统证实ciRS-7吸附结合miR-7。同时过表达miR-7及ciRS-7组的bcl-2表达高于过表达miR-7组(0.59±0.11,t=6.013,P<0.05)、敲降ciRS-7组(0.83±0.08,t=3.717,P<0.05),差异均有统计学意义。结论 ciRS-7通过靶向miR-7促进食管鳞癌细胞的放疗抵抗。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院; 武汉大学人民医院