烟草疫霉菌LAMP检测方法的建立及验证

作者：吴娜; 李淑君; 康业斌^*

来源：中国烟草科学, 2020, 41(01): 74-80.

DOI：10.13496/j.issn.1007-5119.2020.01.012

• 烟草疫霉菌
• 烟草黑胫病
• 环介导等温扩增(LAMP)
• 羟基萘酚蓝(HNB)

为了建立烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica)可视化快速检测方法,试验以羟基萘酚蓝(HNB)为指示剂,以烟草疫霉菌特异的核糖体转录间隔区(Internaltranscribedspacer,ITS)为目的 DNA片段,应用LAMP设计软件设计4条引物,通过优化LAMP反应体系和反应条件,建立一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果进行验证。结果表明,本试验建立的烟草疫霉菌LAMP反应体系具有较好特异性且灵敏度较高。特异性检测只有烟草疫霉菌株LAMP产物为阳性(蓝色),且电泳结果能够产生梯形条带;灵敏度验证在DNA水平上可达到100 fg,是普通PCR检测方法的1000倍。对田间疑似黑胫病病株及其根际土样提取的DNA进行LAMP检测,各有3份样本为阳性,且病株检测结果与组织分离法对烟草疫霉的检测结果相一致;接种2 d后,病害症状还不明显的烟株中即可检测到烟草疫霉菌。本研究建立的烟草疫霉LAMP检测体系,可快速、简捷地检测到病株及其携带土壤中的烟草疫霉菌。

• 单位
  河南科技大学; 河南省农业科学院