黑果枸杞ISSR-PCR反应体系的正交设计优化

作者：钱前; 王钧; 王莉; 李毅; 胡延萍^*

来源：分子植物育种, 2018, 16(19): 6398-6406.

DOI：10.13271/j.mpb.016.006398

• 黑果枸杞
• 枸杞属
• ISSR-PCR
• 正交试验设计
• 反应体系

黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)为茄科枸杞属小灌木。果实为黑紫色球形浆果,具有较高的药用价值、营养价值、生态价值和经济价值。该研究以青海省野生黑果枸杞为材料,将对黑果枸杞ISSR-PCR反应产生主要影响的五种因子(Taq DNA聚合酶, dNTP, Mg2+,引物和模板DNA)进行L16(45)的正交试验,以建立黑果枸杞ISSR-PCR最佳反应体系,并对反应体系进行验证。在此基础上筛选出适宜的ISSR引物,用梯度法优化各引物的最佳退火温度。结果表明:黑果枸杞20μL ISSR-PCR反应体系中包括Taq DNA聚合酶0.02 U/20μL,Mg2+ 1.65 mmol/L,dNTP 0.15 mmol/L,引物0.60μmol/L和模板DNA 50 ng;在100条ISSR引物中筛选出16条最适引物,并确定了各引物的最适退火温度为44℃～54.5℃;最佳扩增程序设定为94℃预变性5 min;然后94℃变性20 s,44℃～54.5℃复性1 min,72℃延伸1 min 20 s,共进行38个循环;最后72℃延伸6 min,4℃保存。该体系在黑果枸杞不同样品中所得条带清晰且多态性丰富,有助于后续青海省黑果枸杞种质资源筛选和遗传多样性分析研究。

• 单位
  中国科学院西北高原生物研究所; 中国科学院大学