利用可控表达Cyclin B1的单克隆细胞株寻找与Cyclin B1结合的蛋白

作者：何乐亚; 魏欣; 徐丰; 闵江; 刘鹭; 李国东; 傅寅佳; 陶德定; 胡俊波; 龚建平

来源：华中科技大学学报(医学版), 2012, 41(05): 534-536+540.

DOI：10.3870/j.issn.1672-0741.2012.05.006

• 细胞周期素B1
• 四环素
• 免疫沉淀
• 质谱

目的利用已经构建好的四环素诱导细胞周期素B1(Cyclin B1)表达的单克隆细胞株,探索可能与Cyclin B1相互作用的蛋白。方法加入四环素的单克隆细胞株能表达带有Myc和His标签的Cyclin B1。将未诱导和用四环素诱导48h的细胞裂解后,分别加入10μg Myc的单克隆抗体,用免疫沉淀法(immune precipitation,IP)沉淀可能和Cyclin B1相作用的蛋白,将蛋白混合物行聚丙烯酰胺凝胶电泳,用考马斯亮蓝染色法和银染法明确差异蛋白,再用质谱(massspectrometry,MASS)行蛋白鉴定。结果用质谱鉴定出的蛋白有细胞周期素依赖蛋白激酶1(Cyclin-dependent kinase1,CDK1),细胞周期素依赖蛋白激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK2),有丝分裂阻滞缺失样蛋白1(Mitotic arrest deficient-like protein 1,MAD1-like 1,MAD1L1)和热休克蛋白8(heat shock 70kD protein 8isoform 1)。结论除CyclinB1和CDK1直接相互作用外,Cyclin B1与CDK2、MAD1L1和热休克蛋白8都可能有直接或间接的相互作用。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院