金黄色葡萄球菌fur基因缺失株构建及其生物学特性研究

作者：英兰; 魏常梅; 薛东力; 孙鹏; 额尔德木图; 王艳艳; 王俊瑞^*

来源：中国病原生物学杂志, 2018, 13(08): 843-847.

DOI：10.13350/j.cjpb.180810

• 金黄色葡萄球菌
• 铁吸收调节蛋白
• 基因敲除

目的构建金黄色葡萄球菌Newman株fur基因缺失株,对其体外增殖、细胞侵袭及溶血活性特征变化进行研究,为通过封闭Fur蛋白表达治疗金黄色葡萄球菌感染提供新的实验依据。方法采用Gateway同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman株fur基因缺失株,采用分光光度法检测其体外增殖活性变化;采用万古霉素保护试验检测其对A 549肺腺癌细胞株侵袭力的变化;观察其在血琼脂培养基上的溶血活性变化;采用实时荧光定量PCR检测fur缺失株α溶血素(hla)基因mRNA表达水平变化。结果成功构建金黄色葡萄球菌Newman株fur基因缺失株并通过PCR方法和测序方法验证。与Newman野生株相比,同一时间点侵入A 549肺腺癌细胞株内fur缺失株菌量(2 950CFUs/ml)显著少于野生株(20 100CFUs/ml,P<0.01),缺失株体外增殖活性及溶血活性显著减弱,且hla基因mRNA相对表达量(0.067)显著低于野生株(0.270)(P<0.05)。结论金黄色葡萄球菌fur缺失株在富铁条件下的增殖活性、细胞侵袭力及溶血活性均显著降低,对环境铁浓度感应及利用能力明显降低,Fur蛋白可能作为抗金黄色葡萄球菌感染治疗的新靶点。

• 单位
  内蒙古医科大学附属医院; 内蒙古医科大学; 内蒙古自治区第四医院; 聊城市人民医院; 河北省人民医院