结核分枝杆菌融合蛋白Ag85B-Hsp16.3的表达、纯化和鉴定

作者：**; 师长宏; 赵佐庆; 赵勇; 江鹰

来源：中国人兽共患病学报, 2010, (10): 953-956.

• Ag85B
• Hsp16.3
• 融合蛋白
• 原核表达
• 纯化 Ag85B
• Hsp16.3
• fusion protein
• prokaryotic expression
• purification

目的将结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B与Hsp16.3在大肠杆菌中融合表达并对其进行纯化和鉴定。方法采用PCR方法从质粒pProEX HTb-Hsp16.3扩增Hsp16.3基因,引入48bp的柔性linker结构以确保两蛋白的正确折叠。将目的片段克隆至pMD18-T载体中进行测序。将测序正确的基因片段双酶切后,替换质粒pProEX HTa-Ag85B-ESAT6中的ESAT6基因,从而获得重组质粒pProEX HTa-Ag85B-Hsp16.3,并转化入大肠杆菌DH5α。经IPTG诱导后进行融合表达,并分别用抗Ag85B多抗和抗Hsp16.3单抗以及活动期结核病人血清进行Western blo...

• 单位
  第四军医大学