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摘要
目的构建重组质粒pET32a-AKT1,利用原核表达体系表达AKT1蛋白。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增AKT1编码区基因,并将其与pET32a质粒融合,并转化大肠埃希菌DH5α及原核菌株BL21(DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blot进行蛋白鉴定。结果目的基因与质粒完整融合;重组质粒pET32a-AKT1成功转入菌株DE3;IPTG诱导后,DE3表达相对分子质量为70 000的蛋白。结论成功构建重组质粒pET32a-AKT1,且AKT1蛋白在原核表达菌DE3中完整、高效表达。
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