重组泛素连接酶tTRIP-U-box的构建与表达

作者：钟代星; 王秦豪; 茹懿; 药立波; 李霞

来源：现代生物医学进展, 2013, (27): 5205-5208.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2013.27.001

• 重组泛素连接酶
• 破骨细胞
• 基因表达 Recombinant ubiquitin ligases
• Osteoclast
• Gene expression

目的:构建重组泛素连接酶tTRIP-U-box,并克隆进入pFLAG-CMV4真核表达载体,为研究通过靶向降解接头蛋白TRAF(TNF Receptor Associated Factor)家族蛋白,从而抑制破骨细胞活性提供基础。方法:分别设计引物,扩增tTRIP(TRAF-interacting protein)分子C端伸展的coiled-coiled结构域以及E 3泛素连接酶CHIP的U-box结构域,再利用重组PCR,将tTRIP与U-box进行融合,双酶切之后将其插入真核表达载体pFLAG-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HEK-293T细胞系,Western印迹验证重组质粒的表达...

• 单位
  第四军医大学