干扰FoxO1慢病毒包装及稳转大鼠骨髓间充质干细胞株的建立

作者：徐海瑾; 徐彧; 孔斌; 李雄; 李建宁; 李卉; 曹婷婷; 宋辉^*

来源：宁夏医科大学学报, 2023, 45(09): 865-870.

DOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2023.09.001

• 糖尿病
• 大鼠
• 骨髓间充质干细胞
• 叉头状转录因子O1
• 慢病毒载体

目的 建立干扰叉头状转录因子O1(FoxO1)的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)稳转株，为研究BMSCs定向分化提供条件。方法 提取大鼠原代BMSCs。构建FoxO1干扰载体，扩增后进行测序鉴定。FoxO1质粒瞬转293T细胞后，通过Western blot验证其干扰效果，并选择干扰效果最好的质粒载体。然后通过三因子慢病毒包装系统将FoxO1质粒和两个辅助质粒共转染293T细胞，包装慢病毒，组名为sh1,sh2,sh3,Vector。包装的干扰慢病毒和阴性对照病毒感染大鼠BMSCs，通过Western blot和RT-qPCR检测其表达效果。结果 成功提取大鼠原代BMSCs；测序结果显示，重组FoxO1质粒构建成功；重组FoxO1质粒瞬时转染293T细胞48 h，细胞荧光明显，表明EGFP表达良好；Western blot结果显示，载体中标签蛋白表达成功，并筛选到干扰效果最佳的目的质粒sh1-FoxO1；干扰FoxO1慢病毒滴度为1×108TU·μL-1；包装完成的慢病毒感染BMSCs，经嘌呤霉素筛选后，Western blot结果显示，与Vector组相比，sh1组FoxO1的蛋白相对表达量降低(P<0.05);RTqPCR结果显示，与Vector组相比，sh1组FoxO1的mRNA相对表达量降低(P<0.01)，得到干扰FoxO1的大鼠BMSCs稳转株。结论 成功构建了FoxO1干扰BMSCs稳转株，为进一步研究FoxO1在诱导BMSCs定向分化为IPCs过程中的作用及其潜在机制奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 宁夏回族自治区人民医院; 宁夏医科大学