突变型APP双荧光融合基因的构建和FRET对其表达的研究

作者：李晓晴; 张苏明; 骆清铭; 张智红

来源：中风与神经疾病杂志, 2007, (04): 388-390+513.

DOI：10.3969/j.issn.1003-2754.2007.04.001

• 荧光共振能量转移
• 淀粉样前体蛋白
• 融合基因
• 阿尔茨海默病

目的探讨Alzheimer病的发病机制,研究淀粉样蛋白前体(APP)酶解过程,构建含有Swedish突变的双荧光真核表达系统。方法通过聚合酶链式反应(PCR)得到蓝色荧光蛋白(CFP)和黄色荧光蛋白碱基序列(YFP),生物合成含有Swedish突变的APP中间54个碱基片段(54bp),利用基因工程技术将CFP、54bp、YFP片段克隆至载体质粒pcDNA3.0中,得到重组质粒pcDNA3.0-CFP-54bp-YFP,将其转染至人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中,利用激光共聚焦显微镜观察荧光表达,检测荧光共振能量转移(FRET)。结果酶切和基因序列分析证明重组质粒构建成功;对转染细胞的荧光和FRET检测发现融合基因能够准确表达荧光,同时可以观测到FRET现象。结论含有Swedish突变的荧光融合基因的构建为探索AD的发病机制、活体观察APP裂解奠定了基础。

• 单位
  华中科技大学; 华中科技大学同济医学院附属同济医院; 神经内科