一株抗胰腺癌干细胞单克隆抗体的鉴定及功能研究

作者：孙立新; 解亦斌; 遇珑; 杨治华; 冉宇靓; 孙力超

来源：肿瘤研究与临床, 2014, 26(09): 577-582.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2014.09.001

• 胰腺肿瘤
• 肿瘤干细胞
• 抗体,单克隆
• CD24

目的对一株抗胰腺癌干细胞单克隆抗体(简称:单抗)进行初步鉴定和体外功能研究,为靶向胰腺癌干细胞治疗胰腺癌提供候选单抗药物。方法应用无血清悬浮培养及PKH26染色确定胰腺癌细胞系PANC-1中肿瘤干细胞的存在。流式细胞术检测PANC-1细胞中有干细胞标志物CD44+CD24+的细胞比例。双色细胞免疫荧光检测CD24和单抗15D2识别的抗原蛋白在PANC-1细胞中的表达情况。无血清悬浮培养法观察单抗15D2对PANC-1成球细胞自我更新的影响。CCK-8法检测单抗15D2对PANC-1细胞增殖和耐药的影响。免疫组织化学检测单抗15D2识别的靶抗原在人胰腺癌、癌旁组织中的表达情况。结果 PANC-1细胞能在无血清培养液中存活、增殖并形成细胞球,成球率为(2.5±0.5)%。PANC-1球体细胞中CD44+CD24+细胞的比例较亲本细胞提高了11.4倍,其中CD44+CD24+细胞占CD24+细胞的97%,在此体系中用CD24作为PANC-1细胞干细胞标志物。细胞免疫荧光结果显示单抗15D2识别的抗原分子在细胞膜上表达,并能与CD24在PANC-1细胞共定位。抗体体外功能研究发现,单抗15D2能显著抑制PANC-1细胞在无血清培养液中成球,抑制率达到22%。同时,单抗15D2联合吉西他滨能显著抑制PANC-1球体细胞的增殖,联合组和对照组IC50分别为0.10、0.39μmol/L。免疫组织化学检测结果显示,单抗15D2所识别的抗原蛋白在76.9%(11/13)的人胰腺癌组织中表达阳性,而在癌旁组织中表达阳性率仅为10.0%(1/10),差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗胰腺癌干细胞单抗15D2体外能够显著抑制胰腺癌干细胞的自我更新和耐药能力,为胰腺癌干细胞的靶向治疗提供有应用价值的候选抗体药物。

• 单位
  中国医学科学院肿瘤医院; 中国医学科学院北京协和医学院; 分子肿瘤学国家重点实验室