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摘要
目的研究β淀粉样蛋白(β-amyloid, Aβ)对大鼠海马细胞钙稳态和内质网钙库表达的影响。方法将60只成年清洁级雄性SD大鼠按照体质量相匹配的方法分为正常对照组、假手术组、生理盐水组、Aβ25-35高剂量组(7.5 μg/μL)、Aβ中剂量组(5.0 μg/μL)和Aβ低剂量组(2.5 μg/μL), 每组10只。Aβ25-35高、中、低剂量组大鼠按分组分别于海马内微量注射对应剂量的Aβ25-35, 每只动物左右侧海马各注射2 μL;并设立生理盐水组(注射2 μL 0.9%氯化钠溶液)、假手术组(动物做开颅处理, 海马内不注射任何液体)与正常对照组(正常饲养, 不做任何处理)。实验动物饲养至注射后14 d, 观察并记录大鼠行为和状态, 记录体质量和食物摄入总量。应用光学显微镜观察海马组织病理改变, 应用透射电镜观察大鼠海马细胞内质网病理学改变;应用流式细胞仪技术检测大鼠海马内游离Ca2+的浓度;用荧光定量PCR方法和Western blot方法测早老素(PS)、肌质网钙ATP酶(SERCA)和ryanodine受体(RyR)的mRNA和蛋白表达水平。应用SPSS 25.0软件对实验结果进行统计分析, 多组间比较采用重复测量方差分析和单因素方差分析, 组间多重比较采用Dunnett和Tukey检验。结果 (1)各实验组大鼠体质量采用重复测量方差分析, 发现时间主效应显著(F=153.15, P<0.001), 组间效应和交互效应不显著(F=1.547, P=0.374;F=1.598, P=0.113)。与对照组比较, Aβ25-35高、中、低剂量组大鼠在注射后7 d、14 d体质量差异无统计学意义(均P>0.05)。Aβ25-35高、中、低剂量组大鼠食物利用率分别为(22.9±4.0)%、(23.0±4.2)%和(22.6±3.2)%, 与对照组[(23.7±5.0)%]相比均差异无统计学意义(均P>0.05)。注射后14 d内, Aβ25-35高剂量组大鼠出现萎靡和嗜睡的表现。(2)病理观察结果显示, Aβ25-35高剂量组和中剂量组大鼠海马细胞内质网裂隙扩张、肥大, 线粒体肿胀变形。(3)Aβ25-35注射后14 d, 高、中、低剂量组大鼠海马内游离钙所产生的荧光强度分别为(820.43±6.89)、(720.12±4.30)和(680.50±4.32), 均高于对照组(592.17±3.97)(均P<0.001)。(4)RT-PCR和Western blot实验结果显示, 与对照组相比, Aβ25-35高剂量组和中剂量组大鼠海马细胞内PS、SERCA mRNA和蛋白的表达上调(均P<0.05), 同时海马细胞内RyR mRNA和蛋白的表达下调(均P<0.05)。结论 Aβ25-35在海马组织内沉积, 可以破坏海马组织内Ca2+稳态, 游离钙及相关蛋白上调, 从而发挥神经毒性作用。
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