小干扰RNA抑制瞬时感受器电位通道3表达对大鼠内脏高敏感的影响

作者：杨静; 杨宏丽; 李坤; 雷晓斐; 李双玲; 徐昌青

来源：中华消化病与影像杂志(电子版), 2016, 6(06): 255-260.

• TRPC阳离子通道
• RNA,小分子干扰
• 内脏高敏感

目的探讨鞘内注射经典瞬时感受器电位通道3(TRPC3)特异性小干扰RNA(siRNA)对大鼠内脏高敏感性的调节作用。方法 56只Sprague Dawley雄性乳鼠随机数字表法分成4组,每组14只,应用醋酸灌肠建立大鼠内脏高敏感模型,其中3组为模型组,出生后第821天予0.5%醋酸溶液0.3 ml灌肠,1组为对照组,出生后第821天予0.9%氯化钠注射液0.3 ml灌肠。出生后第8周进行试验,4组大鼠均予鞘内置管,每天鞘内注射1次,共干预3 d:对照+空白组、模型+空白组鞘内注射去核酸酶水(20μl/次);模型+错配siRNA组鞘内注射错配siRNA(20μg/20μl/次);模型+TRPC3-siRNA组鞘内注射TRPC3-siRNA(20μg/20μl/次)。注射结束1周后应用实时定量PCR及蛋白印迹法检测4组大鼠支配结肠的L5-S1节段背根神经节(DRG)神经元TRPC3 mRNA与蛋白表达水平;通过不同压力结直肠扩张(CRD)后腹壁收缩反射(AWR)评分及疼痛感觉阈值、最大容量阈值检测评估大鼠内脏敏感性。结果相较于对照+空白组,模型+空白组DRG的TRPC3 mRNA和蛋白表达均显著升高(P值分别为0.002、0.029);相较于模型+空白组,模型+TRPC3-siRNA组DRG的TRPC3 mRNA与蛋白表达显著降低(P值分别为0.002、0.001);模型+错配siRNA组与模型+空白组TRPC3表达差异无统计学意义(P>0.05)。内脏敏感性检测结果提示不同压力CRD后,相较于对照+空白组,模型+空白组在40、60、80 mmHg AWR评分升高(P均<0.01),疼痛感觉阈值与最大容量感觉阈值下降(P均<0.001),提示内脏高敏感模型成功建立。相较模型+空白组,模型+TRPC3-siRNA组大鼠在60、80 mmHg压力扩张时AWR评分显著下降(P均<0.01),疼痛感觉阈值与最大容量感觉阈值显著升高(P值分别为0.007、0.023)。模型+错配siRNA组与模型+空白组比较AWR评分与感觉阈值差异无统计学意义(P>0.05)。结论鞘内注射siRNA靶向阻断TRPC3的表达对大鼠内脏高敏感具有改善作用,TRPC3可能作为关键分子参与肠道高敏感的发生机制。

• 单位
  山东省千佛山医院