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摘要
目的建立高效、经济的细粒棘球蚴生发细胞原代培养方法。方法采用0.25%胰蛋白酶鄄EDTA溶液消化鼠细粒棘球蚴囊壁10～30 min,以消化后的棘球蚴囊壁残片进行组织贴壁培养原代生发细胞,以单纯组织贴壁培养法作为对照。用倒置显微镜观察生发细胞形态学动态变化,绘制生长曲线。免疫荧光试验鉴定获得的生发细胞。取残片培养的生发细胞进行小鼠腹腔返种, 4个月后剖检小鼠,观察小鼠感染情况;取病变组织制石蜡切片、 HE染色后,镜下观察棘球蚴囊壁生长情况。结果 0.25%胰蛋白酶鄄EDTA溶液消化10 min囊壁残片中的生发细胞的完整性好,胞浆丰富, 2～4 d后囊壁残片边缘游离出生发细胞,生发细胞培养9 d后呈现集落样生长状态。0.25%胰蛋白酶鄄EDTA溶液消化20 min、 30 min的囊壁残片中的生发细胞破碎并出现裸核。采用0.25%胰蛋白酶鄄EDTA溶液消化10 min的残片培养法培养生发细胞的成功率(6/10)高于单纯组织贴壁法(3/10);两种方法生长曲线均近似"S"形,残片培养法周期较短(18 d),残片培养法培养的生发细胞生长增殖水平高于单纯贴壁培养法(P <0.01)。免疫荧光结果显示,残片培养法培养18 d的生发细胞可被感染棘球蚴的人阳性血清中的抗棘球蚴抗体识别。残片培养法培养的生发细胞返种结果显示,小鼠腹腔有新生的棘球蚴囊状结构出现。HE染色结果显示,镜下可观察到发育中的棘球蚴囊壁角质层和生发层。结论建立的0.25%胰蛋白酶鄄EDTA溶液消化10 min的鼠源棘球蚴囊壁残片贴壁培养法可培养出活性正常的生发细胞,并能感染小鼠。
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