常见耐药基因多重PCR方法的建立及用于禽致病性大肠杆菌耐药性监测

作者：张耀东; 朱红; AFAYIBO Dossêh Jean Aptre; 王瑶; 易正飞; 信素华; 陶程琳; 李涛; 祁晶晶; 田明星; 丁铲; 于圣青^*; 王少辉^*

来源：畜牧兽医学报, 2020, 51(12): 3193-3198.

• 耐药基因
• 多重PCR
• 检测

本研究旨在建立β-内酰胺类、四环素类、氨基苷类、酰胺醇类、磺胺类抗菌药物耐药基因的多重PCR检测方法,用于耐药基因的快速检测。根据GenBank公布的上述5类抗菌药物的耐药基因序列,设计17对特异性引物。通过优化PCR体系和反应程序,建立4组耐药基因(cat+floR+tetB+tetC;dfrA12+sul2+sul1+blaCTX-M+balTEM-1;aac3+aph3+aadA1+strB;tetA+cmlA+strA+sul3)的多重PCR反应体系。然后,检测多重PCR方法的特异性和敏感性。利用建立的多重PCR方法检测42株禽致病性大肠杆菌的耐药基因,同时,检测其耐药性,比较分析耐药基因和耐药表型之间的相关性。结果显示,建立的4组多重PCR体系可有效扩增出17个耐药基因片段,测序结果表明特异性较好。敏感性结果表明,4组多重PCR体系的菌液敏感性分别为103、104、104和105CFU。禽致病性大肠杆菌分离株的耐药基因多重PCR和单重PCR检测结果一致,其携带的耐药基因和耐药表型的符合率为92.86%。本研究建立的耐药基因多重PCR方法能简便、快速地检测常见的耐药基因,可用于耐药基因的传播、流行调查。

• 单位
  中国农业科学院上海兽医研究所