Cas9稳定表达人肿瘤细胞株的建立及其基因编辑活性

作者：卞晓翠; 杨振丽; 冯海凉; 赵晓梅; 顾蓓; 李姜; 孙昊; 刘玉琴

来源：中华病理学杂志, 2017, 46(01): 43-48.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0529-5807.2017.01.010

• 细胞系, 肿瘤
• 基因编辑

目的建立多种Cas9蛋白稳定表达的人肿瘤细胞株, 验证细胞中Cas9的基因编辑活性, 方便后续研究中目的基因的编辑。方法在15种来自不同组织的人肿瘤细胞株中通过慢病毒感染pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo或pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro及克隆筛选的方式建立Cas9稳定表达的细胞株;在其中3个细胞株中瞬时转入靶向TSC22基因的向导RNA, 挑选单克隆, 通过基因组PCR、测序及Western blot检测Cas9蛋白的基因编辑活性。结果筛选得到了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株, 瞬时转入向导RNA后成功造成了细胞中TSC22基因的大片段缺失。结论成功建立了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株, 其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。这些细胞株在大规模药物筛选、新药作用靶点的筛选以及基因功能研究等方面有潜在应用价值。

• 单位
  北京协和医学院; 中国医学科学院基础医学研究所