PADI4-siRNA-MSN的构建及其在RA防治中的初步应用

作者：陈赛阁; 成宇; 宗明; 范列英^*

来源：中国免疫学杂志, 2018, 34(10): 1515-1520.

DOI：10.3969/j.issn.1000-484X.2018.10.016

• 类风湿关节炎成纤维滑膜细胞
• 介孔二氧化硅纳米载体
• 小分子干扰
• 细胞凋亡
• 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4

目的:制备介孔二氧化硅纳米载体(MSN)并包载肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)小干扰RNA(PADI4-siRNA-MSN),阐明PADI4-siRNA-MSN对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响。方法:采用模板法合成MSN,包被阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)及荧光标记分子罗丹明B(Rh B),检测其表征,包括粒径、Zeta电势、荧光和形貌。设计并合成2对FAM标记的针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链(si-944、si-1225)及阴性对照si-NC,制备PADI4-siRNA-MSN和siNC-MSN,转染RA-FLS,流式细胞术(FCM)鉴定转染率。采用荧光定量PCR、蛋白印迹技术检测转染48 h后,干扰组和阴性对照组细胞PADI4表达量,FCM检测细胞凋亡率,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察PADI4-siRNA-MSN胞内分布。所有数据采用配对t检验进行分析。结果:MSN经表征检测显示已成功制备并包被Rh B、PEI,FCM结果显示转染率为93. 3%(si-944)和91. 9%(si-1225)。si-NC组中的PADI4 mRNA水平为1. 23±0. 27; si-944、si-1225干扰组中分别为0. 35±0. 12、0. 44±0. 12,均显著低于阴性对照组(P<0. 05)。蛋白印迹结果与PCR结果一致。与si-NC组细胞凋亡率(8. 83±0. 15)相比,si-944和si-1225组细胞凋亡率(11. 72±0. 82,13. 00±1. 42)显著增加(P<0. 05)。CLSM结果显示PADI4-siRNA-MSN分布于核周。结论:PADI4-siRNA-MSN成功制备,并转染RA-FLS,有效沉默PADI4基因,显著增加RA-FLS的凋亡率。PADI4-siRNA-MSN在抑制RA-FLS增殖、促进凋亡中具有一定的应用前景。

• 单位
  同济大学附属东方医院