大鼠尾椎间盘髓核细胞的分离、培养与鉴定

作者：朱厚毅; 王运涛; 王锋; 时睿; 康新桂; 崔佳瞿

来源：东南大学学报(医学版), 2016, 35(01): 1-6.

• 尾椎间盘
• 髓核细胞
• Ⅱ型胶原
• 组织工程

目的:利用单纯Ⅱ型胶原酶消化法从大鼠尾椎间盘获取髓核细胞,拓展组织工程髓核细胞的获取途径。方法:单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离培养大鼠尾椎间盘髓核细胞,镜下观察细胞形态,行HE、甲苯胺蓝、免疫组化及免疫荧光染色鉴定观察;取原代和传代细胞行细胞活性检测;取P1代细胞检测,绘制生长曲线并行细胞周期分析。结果:成功分离出大鼠尾椎间盘髓核细胞。P0代细胞中包含多角形类软骨样细胞、体积大且胞浆中含有大量空泡的脊索样细胞;经传代纯化后最终得到较高纯度的软骨样髓核细胞。台盼蓝细胞活力测定P0代活力高达99%,到P3代细胞活力稍下降,为95%97%。细胞生长曲线及周期测定示P1代细胞有较强增殖潜能,活力旺盛。胞浆内蛋白聚糖被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫组化呈阳性,表现为黄褐色沉淀;Ⅱ型胶原免疫荧光染色示强阳性表达。结论:大鼠尾椎髓核组织可以提供代谢旺盛、维持类软骨表型的髓核细胞。

• 单位
  东南大学附属中大医院; 东南大学